【导读】


一、造血干细胞的贮存温度和时间

造血干细胞在22℃-25℃保存24小时后，活力明显下降，2天后则功能完全丧失，而在2℃-5℃的情况下可保存3天，5天后活力几乎完全丧失。故造血干细胞在4℃条件下保存，操作方便，设备简单，样品不需任何处理，但所保存的干细胞移植时须在3天内使用，且要防止病原菌污染。

造血干细胞在-79℃保存不能超过两年，在液氨内(-196℃)可保存至少十年，细胞活性无显著性差异。目前看来，在液氨温区较长期保存造血干细胞是比较适宜的。


二、造血干细胞的冷冻方法

将采集到的干细胞和冰冻保护剂分别于4℃预冷20-30分钟，在专用冷冻袋中按设定配比混合均匀，经4℃平衡15-20分钟，用薄层铝板或不锈钢板夹住塑料袋，使其厚度不超过lcm,以使冷冻时降温均匀，解冻迅速。通常采用慢速冷冻降温的方法(两阶段梯度温度)降温。第一步冷冻速度以1℃/min由4℃～-30℃，第二步则以5℃～10℃/min由-30℃～-80℃。降温结束后，将样品取出置于液氮容器的液相中长期保存。需要时将冰冻保存的造血干细胞从液氮中取出，放42℃恒温水浴中快速解冻（2分钟内解冻完毕），解冻后即离心去除含DMSO的上清液，加入适当的液体制成干细胞悬液，供给患者输用。

三、干细胞活性及功能测定方法

染料排斥试验：此方法是细胞悬液活与台盼蓝(trypen-blue)或伊红染料混合，着色地为损伤细细胞，未着色的为活细胞。此方法简单、快速，但它不能表明造血干细胞的活性情况。

分别检测冷冻保存前后有核细胞计数和单个核细胞计数。

干细胞集落形成能力测定：由于目前对人的多功能造血干细胞尚不能直接测定，一般以粒系-巨核系定向祖细胞(CFU-GM及CFU-GEMM、BFU-E等)作为指标，它们在CSF(集落刺激因子)存在的条件下，诱发生成粒系-巨核系细胞集落等。目前多采用体外半固体琼脂培养法测定造血干细胞的活力。

经典的方法是致伤动物本身，使其造血功能受到严重破坏就彻底摧毁，而移植造血干细胞后可使动物存活，反映造血干细胞的造血重建功能。


王春发，沈阳中心血站副主任医师，对血液制品的管理有丰富的经验。