上海迪医明生物科技有限公司(ShanghaiDeemingBiotechnologyCo.,Ltd.)是一家专注从事细胞生物学产品的研发、生产、销售，提供实验技术服务的国家高新技术企业。公司位于上海市奉贤区。迪医明生物拥有GMP级标准实验室规模超3500平方米，全球技术资源和经验丰富的管理团队，坚持以技术创新为先，以产品质量为保障，以客户价值为根本，在激烈的市场竞争中快速发展。
迪医明生物干细胞系列产品检测结果表明，细胞无细菌、真菌、霉菌、支原体和病毒污染，表达多种间充质干细胞特异性标记，具有良好的增殖和分化潜能，可分化为成骨细胞、脂肪细胞、软骨细胞等。
产品性能
1.细胞形态
2.细胞表型
间充质干细胞P20代细胞表型
流式细胞仪鉴定细胞表型
3.细胞诱导分化
3.1成脂、成骨、成软骨诱导分化操作步骤
所需材料
0.05%%EDTA（货号：CD05-001C）
Phosphate-BufferedSaline(1×PBS)（货号：BS01-001C）
间充质干细胞完全培养基（货号：CM01-001A）
间充质干细胞成脂诱导分化完全培养基（货号：DM01-001B）
间充质干细胞成骨诱导分化完全培养基（货号：DM02-001B）
间充质干细胞成软骨诱导分化完全培养基（货号：DM03-001B）
成脂诱导分化步骤
注意：本操作规程以六孔板为例
1.将间充质干细胞置于37℃，5%CO2的培养箱中培养。
2.当细胞生长到达对数期时，用0.05%%EDTA进行消化。
3.将消化下来的间质干细胞按照2×104cells/cm2的细胞密度接种在六孔板中，每孔加入2mL完全培养基。
4.将细胞置于37℃，5%CO2的培养箱中进行培养。
5.每隔三天换液，直到细胞融合度达到100%或者过融合。
6.小心地将间质干细胞完全培养基吸走，向六孔板中加入2mL间充质干细胞成脂诱导分化培养基A液。
7.诱导3天后，吸走六孔板中的A液，加入2mL间充质干细胞成脂诱导分化培养基B液。
8.24h后，吸走B液，换回A液进行诱导。
9.A液和B液交替作用3-5次后（12-20天），继续用B液维持培养4-7天直到脂滴变得足够大、圆。B液维持培养期间，每隔2-3天需要换用新鲜的B液。
成脂（油红O染色）成骨（茜素红染色）
成骨诱导分化步骤
注意：本操作规程以六孔板为例
1.将间充质干细胞置于37℃，5%CO2的培养箱中培养。
2.当细胞融合度达到80-90%时，用0.05%Trypsin进行消化。
3.将消化下来的间充质干细胞按照2×104cells/cm2的细胞密度接种在事先包被0.1%明胶的六孔板中，每孔加入2mL完全培养基。。
4.将细胞置于37℃，5%CO2的培养箱中进行培养。
5.当细胞融合度达到60%-70%时，小心的将孔内完全培养基吸走，向六孔板中加入2mL间充质干细胞成骨诱导分化完全培养基。
6.每隔3天换用新鲜的间充质干细胞成骨诱导分化完全培养基（使用前需预热至37℃）
7.诱导2-4周后，视细胞的形态变化及生长情况，用茜素红进行染色。
注意：为防止成骨细胞脱落，建议成骨过程中出现大量钙结节之后，换液形式变为每两天一次半量换液。
成软骨诱导分化步骤
1.进行成软骨诱导实验之前，需要对常规消化后的细胞进行计数。
2.将3-4×105个细胞转移到15mL离心管中，250g离心4min。
3.吸去上清，加入0.5mL预混液，重悬上一步离心所得沉淀，以清洗间充质干细胞，室温下150g离心5min。
4.重复步骤3，再次清洗细胞。
5.将上一步所得沉淀用0.5mL间充质干细胞成软骨诱导完全培养基重悬。
6.室温下150g离心5min。
7.拧松离心管盖以便于气体交换，将其放置于37℃，5%CO2的培养箱中培养。
注意：
①此步骤不要吸掉上清和重悬细胞。
②24小时之内不要摇动离心管。
8.当细胞团出现聚拢现象时（一般为24h或48h后，实际视细胞生长情况而定）轻弹离心管底部使软骨球脱离管底悬浮在液体中。
9.自接种开始计算，每隔2-3d给细胞换用新鲜的成软骨诱导完全培养基，每管约0.5mL成软骨诱导分化完全培养基。
注意：小心操作，不要吸出软骨球。
10.换液之后，轻弹离心管底部使软骨球脱离管底悬浮在液体中。稍加拧松离心管盖放入37℃，5%CO2的培养箱中继续诱导培养。
11.一般持续诱导21-28天后，可对软骨球进行福尔马林固定和石蜡包埋切片，最后进行阿利辛蓝染色。
成软骨（阿利新蓝染色）
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